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编号:13170621
燕窝酶解产物中多肽的液相色谱质谱分析(2)
http://www.100md.com 2013年3月1日 《中国中药杂志》 2013年第5期
     2.7数据处理从UniProtKB/Swiss-Prot数据库中提取全部蛋白数据库。将质谱数据使用Bioworks软件中Turbosequest进行数据库检索,检索结果过滤参数:Xcorr≥1.5,DeltaCn≥0.1,二级质谱离子数量>15,并综合考虑目标离子色谱峰的信噪比及二级质谱图中b,y离子匹配性和连续性。

    3结果与讨论

    3.1凝胶过滤分析燕窝中存在许多水溶性蛋白,但其提取温度较高,60~80 ℃条件下部分蛋白质可释放,部分蛋白质在长时间(3~5 h)提取条件下方可得以释放[19];但是,蛋白质在长时间高温处理易发生降解,且蛋白质的热降解过程存在随机性,降解后产生许多序列不规则的多肽,不利于后续的胰蛋白酶酶解和多肽混合物的质谱数据处理以及多肽序列分析[20]。因此,实验采用了分次提取的方式,加入缓冲液提取1 h后进行固液分离,使得溶出的蛋白质避免遭受进一步的高温处理,以减少先溶出蛋白质的降解率;在沉淀物中继续加入缓冲液后重复提取。提取液经合并后采用截留相对分子质量为3 kDa的超滤离心管进一步去除提取过程中可能产生的随机降解后的低相对分子质量多肽,防止非酶降解的小肽对数据检索的影响;实验采用考马斯亮蓝法测定了燕窝中提取的水溶性蛋白质总量 ......
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